ПЦР или ИФА. Когда необходимы оба исследования, а когда можно обойтись одним из них?
Давайте поговорим об одном из важнейших вопросов в диагностике инфекционных заболеваний у животных. На данную тему многое сказано и написано, но у владельцев и заводчиков до сих пор возникают вопросы и сложности. В настоящее время ИФА (иммуноферментный анализ) и ПЦР (полимеразная цепная реакция) являются наиболее достоверными методами диагностики инфекционных заболеваний у животных и человека. Основанные на последних достижениях молекулярной биологии, данные способы исследования быстро вошли в ветеринарную практику и, тем самым, значительно подняли общий уровень диагностики в целом. Каждый из этих методов позволяет оценить ситуацию с определенной стороны, в зависимости от цели, которая ставится при исследовании.
ПЦР – один из самых точных и чувствительных методов в лабораторной диагностике. Он обнаруживает макромолекулы ДНК или РНК возбудителей даже в случае присутствия незначительного их количества в пробе. Генетический материал бактериальной или вирусной инфекции индивидуален, а это значит, что метод обладает самой высокой специфичностью. Принцип ПЦР заключается в том, что происходит многократное избирательное копирование искомого участка генетического кода предполагаемой инфекции. Таким образом, ПЦР – «золотой стандарт» выявления инфекционных агентов. Важным достоинством является то, что вирусные инфекции можно обнаруживать сразу после заражения, за недели или месяцы до того, как проявятся первые симптомы. Метод ПЦР незаменим для выявления латентных (скрытых) и хронических инфекций.
ИФА – это лабораторный иммунологический метод качественного определения и количественного измерения антител к различным возбудителям инфекций, а именно – антигенам. Также антигенами могут выступать собственные клетки организма, образующиеся в результате аутоиммунных или онкологических заболеваний. Метод ИФА обладает высокой чувствительностью и специфичностью, которая в настоящее время составляет более 90% и позволяет обнаружить реакцию организма животного на инфекционный процесс.
Достоинства ИФА — возможность диагностики через 1-3 недели после контакта с возбудителем инфекции и возможность прослеживать динамику развития заболевания.
ИФА, относясь к непрямым методам диагностики, основан на выявлении не самой инфекции, а продуктов ее жизнедеятельности в организме животного — белков–маркеров – иммуноглобулинов, которые вырабатывает иммунная система в ответ на инфекцию. Для каждого возбудителя заболевания продуцируются сугубо индивидуальные антитела, которые впоследствии и будут идентифицированы системой ИФА. Время обнаружения антител зависит как от самой инфекции, так и от особенностей иммунной системы конкретного животного.
Метод ИФА ищет «следы» реакции на вторжение инфекции, а не саму инфекцию!
Наличие иммуноглобулинов не гарантирует присутствия в организме искомого инфекционного агента.
Отсутствие антител не говорит о том, что инфекции нет.
Если результат анализа методом ИФА положительный, то это значит, что нужно искать инфекцию более специфическими методами – ПЦР, бактериологические посевы.
Определить, какой лучше сдать анализ для диагностики, в каждой конкретной ситуации может только врач, назначающий обследование. Для комплексной оценки инфекции, в некоторых случаях, может потребоваться как выявление самого возбудителя (ПЦР), так и определение антител к нему в организме животного (ИФА), с последующим контролем после проведенного лечения.
Случается, что результаты ПЦР и ИФА-диагностики могут не совпадать и в этом случае необходимо грамотно интерпретировать полученные результаты, основываясь на патогенезе предполагаемого инфекционного заболевания.
Амплификатор BIO RAD T-100
Во-первых, стоит помнить, что ПЦР может сказать о наличии возбудителя только в месте взятия биоматериала, которое ограничено (например, смывом из глаза или из носа). Для ИФА–диагностики разницы в месте нет, поскольку ИФА «реагирует» на антитела, которые вырабатываются при инфекционном процессе любой локализации. Как результат — ПЦР–диагностика дает отрицательный, а ИФА — положительный результат. Например, микроорганизмы семейства Chlamydiacеae могут локализироваться в организме животных в различных местах. И анализ ПЦР, взятый в неправильной области, ДНК хламидии не обнаружит. Но ИФА–метод все равно выявит выработку антител, сопровождающую инфекционный процесс. В таком случае необходимо сдавать оба анализа для подтверждения инфекционной природы заболевания.
Единственным ограничением продукции антител в организме при наличии инфекции может быть иммунодефицитное состояние у животного, например, при лейкозе или иммунодефиците у кошек.
Во-вторых, если результат ИФА пришел положительным, то не стоит сразу приступать к лечению инфекционного заболевания, необходимо сопоставить данный результат с клинической картиной и, возможно, результатами других методов обследования. Известно, что после пройденного курса лечения антитела могут оставаться в организме очень долго, даже после того, как инфекция покинула тело, то есть остается так называемый «серологический шрам» – след от уже перенесенной инфекции. Причем, в связи с индивидуальными особенностями иммунной системы, положительный результат ИФА–диагностики, вызванный повышенным содержанием антител, может сохраняться несколько месяцев и даже лет после полного выздоровления животного. Но возможно и обратное, например, после лечения хламидиоза, микоплазмоза – заболеваний, поражающих органы дыхания, желудочно-кишечный тракт, репродуктивные органы, уровень антител в крови значительно снижается, так как иммунитет против этих заболеваний у животных не развивается.
Следует помнить, что антитела в организме могут образовываться в ответ на недавнюю вакцинацию и высокий их уровень, очевидно, может быть связан с искусственным введением антигена в организм животного.
Немаловажно то, что материал, взятый сразу после лечения инфекции, может содержать мертвые частицы микроорганизмов, которые метод ПЦР идентифицирует за счет своей высокой чувствительности. В таком случае, результат будет ложноположительный.
Хронические инфекционные заболевания могут стать причиной разницы в результатах ИФА и ПЦР. При этом зачастую ПЦР дает положительный, а ИФА — отрицательный результат. Уставшая от хронического инфекционного процесса иммунная система может «не показать» повышенный уровень антител к инфекции. Подобное может наблюдаться и в том случае, если инфекция «свежая», даже при наличии определенных симптомов заболевания уровень антител в крови не превысит норму, поскольку они еще не начали вырабатываться. При данных ситуациях необходимы не только оба исследования, но и клинический анализ крови, и дополнительные методы оценки клеточного иммунитета.
Получение положительного результата ПЦР может быть вызвано использованием тест-систем, которые выявляют все виды бактерий, в том числе и те, которые в определенном количестве в норме содержатся в организме животного. Например, тест-система для ПЦР–диагностики настроена на выявление всех видов микроорганизмов семейства Chlamydiaceae: Chlamydophila Pneumonia, C. Psitaci, C. Abortus, C. felis. Однако хламидиями заражено примерно 18-38% собак, а клинически выраженный хламидиоз встречается в спорадических случаях. Носительство хламидий выявляется также у 65-70 % кошек. Кошки – латентные носители возбудителя (содержится в слюне, моче, экскрементах, на лапках внешне здоровых животных). Поэтому положительный результат ПЦР–анализа в таком случае должен быть правильно интерпретирован врачом, согласован с материалом исследования, картиной заболевания и, обязательно, ИФА – диагностикой крови пациента.
Другой пример: у кошек встречается несколько видов микроорганизмов рода Mycoplasma, чаще всего М. felis и М. gatae. Это частые обитатели слизистых оболочек, М. felis и М. gatae обнаруживаются у 70-80% здоровых кошек. Предполагается, что М. felis может быть патогенной, а М. gatae – естественный коммерсал конъюнктивы и верхних дыхательных путей кошек (то есть безвредная микрофлора). При проведении ПЦР–анализа результат может быть положительным, а ИФА – отрицательным, вследствие отсутствия специфической реакции организма на присутствующую условно-патогенную микрофлору, следовательно, возможное заболевание, например, конъюнктивы глаз было вызвано не данным микроорганизмом.
Ветеринарному врачу необходимо понимать патогенез того или иного заболевания, так коронавирусная инфекция кошек, вызываемая семейством Coronaviridae, а именно штаммами FIPV, подавляет иммунитет, и антитела к возбудителю могут и не обнаруживаться. Положительный результат ИФА говорит о наличии в организме коронавируса, но не дает информации о том, где этот вирус находится – в кишечнике или в тканях.
В связи с этим важным является непосредственное выявление возбудителя заболевания – ПЦР. Однако использование метода ПЦР не может позволить провести дифференциацию условно-патогенных и патогенных штаммов в организме и отличить состояние носительства от заболевания, вызывающего тяжелый перитонит, как правило, с летальным исходом. Положительный ответ ПЦР при выделении вируса с фекалиями говорит о том, что животное в данный момент представляет опасность для окружающих кошек. Согласно ряду исследований, некоторые кошки, в организме которых еще находится вирус, перестают распространять его в течение нескольких недель. Но есть вероятность длительного вирусоносительства, с повторяющимися периодами выделения вируса во внешнюю среду со слюной и фекальными массами.
Подводя итоги, можно сказать, что и ИФА, и ПЦР–анализы сами по себе не являются панацеей в диагностике инфекций. Нельзя одной ПЦР или ИФА–диагностикой заменить все существующие методы исследования, ими можно лишь дополнить их, позволив всем методам достигнуть реальных, точных, достоверных результатов.
Заведущая лабораторий – Тосторожева А.Б. ВЛДОЦ СТАТУС. Март 2017 г.
Источник
Иммунодефицит кошек
Иммунодефицит кошек (ВИК-вирусный иммунодефицит кошек или FIV — feline immunodeficiency virus) — тяжелое заболевание, поражающее иммунную и нервную системы, относится к семейству ретровирусов. Структурно, биохимически и по своей нуклеотидной последовательности ВИК родственен к вирусу иммунодефицита человека (ВИЧ), но иммунодефицит кошек не инфицирует человеческие клетки и специфичен только для семейства кошачьих. Дикие представители семейства кошачьих так же могут заразиться ВИК.
Источники заражения
1. Высокая концентрация вируса отмечена в слюне, в связи с этим, основным способом передачи инфекции является контактный, через укусы и царапины животных. Группу риска составляют взрослые коты свободного содержания.
3. С укусом кровососущих насекомых
4. От матери плоду (внутриутробное заражение) и инфицирование при грудном вскармливании.
5. При переливании крови. Крайне важно проводить полную диагностику донора крови.
Клинические симптомы
Первые признаки проявляются через 3-6 недель после инфицирования вирусом. Развивается картина острого заболевания, характеризующаяся:
b) лихорадкой-повышение температуры
c) лимфаденопатией — увеличением лимфоузлов
d) лейкопенией – снижением лейкоцитов в крови
e) нейтропенией – снижением нейтрофилов в крови
Далее ВИК переходит латентный период, длящийся от нескольких месяцев до 3-5 лет, после которого постепенно нарастают явления синдрома хронического иммунодефицита.
На данной стадии заболевания у животного могут быть следующие симптомы:
a) отказ от еды и анорексию
a) лейкопения – снижение общего количества лейкоцитов
b) лимфопения – снижение общего количества лимфоцитов
c) нейтропения — снижение общего количества нейтрофилов
Клинические симптомы иммунодефицита кошек обычно связаны с вторичными инфекциями:
— большинство ВИК-инфицированных кошек обычно имеют хронический стоматит и/или калицивирусную инфекцию в носоглотке.
— токсоплазмоз чаще обнаруживают у ВИК-инфицированных кошек, чем у неинфицированных, а ВИК-обусловленная иммуносупрессия может быть связана с клиническим проявления токсоплазмоза у кошек.
— кожные болезни вызванные грибковыми, бактериальными инфекциями, а также паразитарными заболеваниями: клещами Notoedres, Cheyletiella, Demodex, чаще проявляются у ВИК-инфицированных кошек.
Считается, что неврологические заболевания вызывает прямая ВИК-инфекция ЦНС. ВИК-обусловленные неврологические заболевания проявляются в виде двигательных, сенсорных нарушений или поведенческих нарушений, включая аномалии сна.
Диагностика
Для диагностики иммунодефицита у кошек в лаборатории «Шанс Био» применяют несколько вариантов тестирования:
— Серологический метод (ИФА-иммуноферментный анализ/ИХ-иммунохроматография)-экспресс тест:
ИФА и ИХ методы ориентированы на определение антител к ВИК. В связи с быстротой выполнения анализа, в течении 1 часа, ИФА наиболее часто используемый метод для диагностики ВИК.
Рекомендации к ИФА для диагностики иммунодефицита кошек:
1. Возраст >6 месяцев. Положительный результат у котят возрастом менее 6 месяцев, родившиеся от ВИК-инфицированной кошки, необходимо подтверждать ПЦР методом из-за присутствия материнских антител. Отрицательный результат означает, что котята, вероятнее всего, ВИК-отрицательны.
2. Отсутствие вакцинации от иммунодефицита кошек. Через 2-3 недели после вакцинации вырабатываются антитела к ВИК, из-за чего результат теста будет ложноположительным.
На последних стадиях ВИК результат методом ИФА может быть ложноотрицательным, из-за серьёзной иммуносупрессии организма животного.
— ПЦР(real time) метод
Лечение
Лечение иммунодефицита у кошек основано на профилактике вторичных инфекций и снижении тяжести клинических инфекций. Для контроля вторичных и сопутствующих бактериальных инфекций часто используют антибиотики. Для каждого животного лечение подбирается индивидуально. Правильную схему лечения может назначить ветеринарный врач .
ЛАБОРАТОРНО-ДИАГНОСТИЧЕСКИЙ ВЕТЕРИНАРНЫЙ ЦЕНТР «ШАНС БИО» работает с 2006 г. Наши ветеринарные врачи имеют огромный опыт в диагностике и лечении.
Многоступенчатый контроль качества анализов позволит точно и в кратчайшие сроки определить наличие или отсутствие инфекции.
Вы всегда можете заказать вызов ветеринарного врача на дом для взятия всех необходимых анализов.
Телефон для консультации и записи на прием +7(495) 260-0-260
Источник
