Значение ретикулоцитов при диагностике регенеративной анемии у кошек и собак.
Материал для исследования.
Для проведения анализа необходима венозная кровь в обьеме 1-3 мл в пробирке с ЭДТА.В пробирку с гепарином кровь набирать нежелательно.Кровь,взятую в пробирку с антикоагулянтом ,следует охладить,если не планируется ее обработка в течение 2-4 ч.Пробу транспортируют на льду.
Дифференцировка клеток происходит из крови(соединительной ткани).Сначало образуется
В результате созревания эритроцитов в костном мозге,они отторгают свои ядра и избавляются от органелл(рибосом и митохондрий),участвующих в синтезе гемоглобина и клеточного метаболизма.Ретикуолоциты(полихроматофильный эритроцит)-это незрелые,лишеные ядер эритроциты,содержащие в цитоплазме неполный «набор»гемоглобина.Термин ретикулоцит относиться к внешнему виду агрегированных базофильных рибосом в цитоплазме незрелых эритроцитов,проинкубированных с красителем.В процессе инкубации происходит сцепление красителя с рибосомами в незрелых эритроцитах и позволяет визуализировать ретикулоциты.
После выхода из костного мозга ретикулоциты проходят дозревание в периферической крови.Самые молодые ретикулоциты,появляющие в периферической крови,которые называются агрегированными ретикулоцитами(в виде глыбок),содержат крупные глыбки преципитировавших рибосом,которые хорошо окрашиваются метиленовым синим.По мере того как созревают глыбчатые ретикулоциты,они становятся зернистыми ретикулоцитами,содержащие мелкие точечные агегаты рибосом,видимые при окраске метиленовым синим.
Физиологические особенности ретикулоцитов.
Ретикулоциты в крови у собак созревают быстрее,и обычно встречаются только агрегированные (сборные)ретикулоциты.
Ретикулоциты в крови у кошек созревают медленнее,чем у собак,и поэтому встречаются как агрегированные(сборные) ,так и зернистые (точечные)ретикулоциты.
При проведении анализа у кошек подчитывются как агрегированные,так и зернистые ретикулоциты.
Продолжительность жизни зернистых ретикулоцитов больше,чем у агрегированных(10-12 дней по сравнению с 12 ч).При подсчете учитываются как сборные,так и точечные ретикулоциты.Большое количество агрегированных клеток свидетельствует об активной регенерации,а наличие зернистых ретикулоцитов указывает о кумулятивной регенерации.Повышенное количество зернистых ретикулоцитов у кошек указывает на ответ костного мозга на анемию,произошедший 3-4 недели назад.
У кошек и собак с регенеративными анемиями из костного мозга будет высвобождаться большее количество ретикулоцитов.Отсутствие ретикулоцитов подтверждает наличие нерегенеративной анемии и позволяет предположить,что анемия обусловлена снижением образования эритроцитов.Для того,чтобы костный мозг ответил на анемию,требуется 3-4 дня,а максимиум полихромазия и ретикулоцитоз достигается через 1 неделю,поэтому после острого кровотечения или гемолиза повышение количества агрегированных ретикулоцитов может не наблюдаться.
В лаборатории НУКЛЕОМ результаты могут быть определены в абсолютном количестве ретикулоцитов.Абсолютное количество ретикулоцитов в микролитре крови считается наиболее надежным и полезным для диагностике образования ретикулоцитов костным мозгом.
Источник
Ветеринарная клиника доктора Шубина
г. Балаково, ул. Трнавская, д 4. тел. +7-987-356-69-05
Вы здесь
Анемия кошек и собак – диагностический подход
Введение
Основная функция эритроцитов — транспорт кислорода (O2) клетками организма и углекислоты (CO2) из организма, участии в буферных системах ионов водорода, поддержание сосудистой целостности и участие в процессах коагуляции.
Анемия — снижение в системном кровотоке уровня циркулирующих эритроцитов. Анемия кошек и собак — это не первичный диагноз, а вторичный процесс, который может развиваться по трем причинам: 1. При снижении выработки и высвобождения эритроцитов в костном мозге; 2. При повышенной утилизации эритроцитов в организме животного (пр. гемолиз); 3. При кровопотере (наружной или внутренней). Т.е., разграничение точного вида анемии идет с учетом уровня производства эритроцитов (гемопоэз) в соотношение со скоростью их разрушения (гемолиз) или потери (внешняя среда а также третье пространство). В ряде случаев, анемия может развиваться при комбинации различных факторов – снижения производства эритроцитов, укорочения их срока жизни и кровопотери.
Анемия как таковая, достаточно часто диагностируется на приеме в ветеринарной клинике (от 10% до 30% пациентов), она может сопровождаться различными клиническими проявлениями (пр. бледность слизистых оболочек, общая угнетенность, непереносимость, нагрузок, сердечные шумы, слабость наполнения пульсовой волны, гемоглобинурия, пика (pica) или протекать без внешних признаков и диагностироваться исключительно лабораторно. По сути, определение анемии как таковой и ее точные характеристики определяются в клинико-диагностической лаборатории, и диагноз анемии — исключительно лабораторный.
Анемии у животных подразделяются на два основных класса – регенеративная и нерегенеративная. Регенеративная анемия – снижение количества эритроцитов с наличием функциональной способности костного мозга к производству и высвобождению эритроцитов. Нерегенеративная анемия – снижение количества эритроцитов по причине или в сочетании со снижением способности костного мозга к производству и/или высвобождению эритроцитов. Ниже представлены основные причины анемий кошек и собак встречающихся на приеме в ветеринарной клинике.
Таблица. Характерные причины анемий кошек и собак.
Регенеративная анемия
Нерегенеративная анемия
Анемия кровопотери
Наружное и внутреннее кровотечение;
– травма (пр. высотная травма, ДТП, покус);
– кровоточащие опухоли (пр. гемангиосаркома селезенки);
– хирургическое кровотечение;
– кровотечение в ЖКТ;
– тяжелый эктопаразитизм (реже эндопаразитизм);
– нарушения гемостаза (пр. отравление антикоагулянтами, болезнь Вон Виллебранда, тромбоцитопения, ДВС).
Гемолитическая анемия
Иммунноопосредованная гемолитическая анемия
Болезнь холодовых агглютининов
Кровепаразиты (Mycoplasma haemofelis, Mycoplasma haemocanis, Babesia canis, Cytauxzoon felis)
Анемия с тельцами Хайнца и метгемоглобинемия
Токсичность цинка или меди
Гипофосфатемия
Наследственная гемолитическая анемия
Дефицит пируваткиназы и фосфорокиназы
Вторичная анемия
Анемия воспалительных заболеваний
Анемии хронического почечного и печеночного заболеваний
Гипотиреоз собак и гипоадренокортицизм
Железодефицитная анемия
Заболевания костного мозга
Нерегенеративная имммуно-опосредованная гемолитическая анемия
Истинная эритроцитарная аплазия
Миелодиспластический синдром
Конгенитальный дизэритропоэз
Апластическая анемия
Воспаление/некроз костного мозга
Миелофиброз
Лейкемия
Пролиферативные нарушение макрофагов.
Медикаментозные гематологические дискразии
Токсичность эстрогена, сульфадиазина, фенилбутазона и др.
Инфекции (эрлихиоз, ВЛК, ВИК, парвовирус собак и кошек)
Ниже представлен один из диагностических подходов после выявлении у кошек и собак, он следует из оценки тяжести анемии, подсчета количества ретикулоцитов, оценки морфологии мазка крови мозга и попытки морфологической классификации.
Оценка тяжести анемии
Первый шаг при оценке анемии у животных в ветеринарной клинике — определение ее тяжести. Для этого могут быть использованы такие показатели как гематокрит (Hct), PCV, уровень гемоглобина и количество эритроцитов. PCV — процент цельных клеток состоящих из эритроцитов, получается при помощи микрогематокритной трубки и центрифуги. Гематокрит вычисляется автоматическими анализаторами после определения среднего размера эритроцита и количества эритроцитов. PCV и ге матокрит обычно взаимозаменяемые показатели и служат основой оценки тяжести анемии. Исключение для этого правила встречается при микроцитарной гипохромной анемии и макроцитарной гипохромной анемии.
Таблица. Классификация анемий кошек и собак по степени тяжести, в зависимости от уровня гематокрита.
При определение тяжести анемии, интерпретация PCV и гематокрита должна проводится исходя из статуса гидратации животного, обычно это достигается при измерении общего белка плазмы на рефрактометре. Дегидратация (обезвоживание, гемоконцентрация) обычно сопровождается снижением объема плазмы и повышением уровня общего белка, что ложно повышает гематокрит животного (относительная полицитемия). Дегидратация может маскировать умеренные формы анемии, чаще это происходит на начальных этапах диагностики. Поэтому, статус гидратации животного должен быть нормализован в течении некоторого времени и только после этого может быть проведена оценка уровня эритроцитов (так, при кровотечении, данное время может занять до 1-2 дней). Гипергидратация напротив сопровождается повышением общего уровня плазмы и снижением общего белка, данный феномен обычно проявляется в ложном снижении уровня эритроцитов, что также требует определенной коррекции. Некоторые трудности отмечаются при гипопротеинемии на фоне кровотечения, заболеваниях кишечника, заболеваниях почечных клубочков и сходных патологиях сопровождающихся потерей белка.
У собак, определенную роль на уровень гематокрита может оказывать тонус селезенки, быстрое ее сокращение может вызывать некоторые изменения в распределении эритроцитов, потому как она содержит до 20%-30% массы красных кровяных телец. У кошек селезенка не принимает столь активного участия в циркуляции эритроцитов, и данный феномен отмечается редко. Выброс эритроцитов из селезенки развивается достаточно быстро, и в норме отмечается у здоровых животных. Меньшее значение на определение уровня эритроцитов оказывает расслабление селезенки с выведением эритроцитов из циркулирующего русла (пр. наркоз).
Существует некоторая разница по течению острой и хронической анемии, при медленном развитии снижения уровня эритроцитов у животного происходит физиологическая адаптация к гипоксемии и они могут в течение недель и месяцев жить с минимальными клиническими проявлениями (пр. гематокрит 5%-8% при хроническом развитии анемии).
При определении тяжести анемии, следует помнить о возрастных и породных отличиях уровня эритроцитов у животных, так у щенков в возрасте 2-х и 8-недельного возраста уровень гематокрита обычно соответствует 28%, у гончих гематокрит обычно имеет более высокие показатели по сравнению с общей популяцией собак.
Трудно оценить тяжесть анемии при метгемоглобинемии, когда общая масса гемоглобина животного находится в пределах нормы, но происходит значительное снижение его способности переносить кислород (пр. отравление угарным газом).
Умеренные по тяжести анемии обычно развиваются вторично к другим негематологическим проблемам (пр. анемия воспалительных заболеваний; неоплазия, почечная и печеночная недостаточность, эндокринные патологии), при этом, основные диагностические и терапевтические усилия должны быть направлены на поиск первичных патологий. Выраженные и тяжелые анемии часто указывают на первичное гематологическое заболевание и требуют активных диагностических и терапевтических действий.
Подсчет ретикулоцитов
Первичное суждение об эритропоэзе животного и состоянии функции костного мозга проводится по его способности производить ретикулоциты. При этом могут возникнуть некоторые трудности, и для более полной оценки используется анализ мазка крови и цитологическое исследование костного мозга.
Ретикулоциты – не зрелые эритроциты высвобождаемые в повышенном количестве из нормального костного мозга в ответ на снижение количества эритроцитов. Ретикулоциты содержат остаточные интрацитоплазматические органеллы (рибосомы, РНК) где продолжается синтез гемоглобина, при окраске новым метиленовым голубым (NMB) или бриллиантовым крезиловым голубым (BCB) при световой микроскопии определяются темно-голубые гранулы.
Ретикулоциты кошек подразделяются на две формы — агрегатные и пунктатные, что отражает значительную разницу в скорости их созревания (в отличии от собак). Вначале у кошек происходит выброс агрегатных ретикулоцитов, которые очень быстро (в течение 12 часов) созревают до пунктатных форм. При оценке мазка крови кошек, агрегатные ретикулоциты содержат более 12-15 точек (капель) вплоть до невозможности определить точное их количество, пунктатные ретикулоциты кошек содержат от 3-12 точек (капель) интрацитоплазматических включений. Пунктатные ретикулоциты достаточно медленно (10-12 дней) созревают в организме кошки до зрелых эритроцитов и скапливаются в кровотоке в значительных количествах (по сравнению с агрегатными). Агрегатные ретикулоциты кошек являются лучшим показателем степени регенерации (по сравнению с пунктатными формами) и абсолютное число агрегатных ретикулоцитов более значимый показатель регенерации чем корректируемый процент ретикулоцитов или индекс их продукции. Пунктатные ретикулоциты кошек отражают общий регенеративный ответ и обычно не подсчитываются.
Ни один из современных автоматических анализаторов не способен точно определить количество пунктатных ретикулоцитов кошек, и при оценке регенеративного ответа следует полагаться исключительно на ручной подсчет. У них также возникают значительные трудности при идентификации типов ретикулоцитов. По паттерну ретикулоцитов кошек может быть предположено время развитии анемии, порядка 4 дней с момента начала развития анемии у кошек достигают пика агрегатные формы ретикулоцитов, затем их количество снижается и продолжается рост количества пунктатных ретикулоцитов. Полихроматофилы кошек с мазком окрашенным красителями Райта обычно отражает количество агрегатных ретикулоцитов.
Собаки также как и кошки, вначале высвобождают агрегатные ретикулоциты, которые очень быстро проходят через стадию пунктатных ретикулоцитов (до 24 часов) и созревают до зрелых эритроцитов. В результате быстрого созревания, ретикулоциты собак первичного состоят из агрегатных форм, они содержат значительные массы преципитированной РНК с незначительным количеством пунктутаных форм. Исходя из вышесказанного, ретикулоциты собак не подразделяются на две формы, ввиду малого количества пунктатных форм и отсутствия их клинического значения в диагностике анемии. Большинство лабораторий не подсчитывают эритроциты как ретикулоциты только с одной или двумя индивидуальными гранулами, а включают их в эритроциты с зернистыми артефактами или преципитатом. Ретикулоциты собак примерно равны полихмроматофилам наблюдаемым при окраске мазка красителями Райта, различные краски варьируют в способности проявлять полихроматофилы.
При анемии кровопотери или гемолитической анемии, костный мозг должен увеличить количество ретикулоцитов согласно тяжести анемии. Максимальная выработка ретикулоцитов отмечается в течение 3-7 дней с начала острого эпизода анемии. Если на начальном этапе количество ретикулоцитов мало, но в мазке крови присутствуют другие признаки регенерации (пр. анизоцитоз, полихромазия) — проводится повторная оценка ретикулоцитов (через 3-5 дней). Подсчет ретикулоцитов проводится при гематокрите менее 30 у собак и менее 20 у кошек. Ниже представлена таблица определения степени регенерации в зависимости от количества ретикулоцитов в периферической крови собак и кошек.
Таблица. Степень регенерации кошек и собак в зависимости от количества ретикулоцитов.
Источник
